1、操作前應將本次操作不需要的物品移出安全柜，并且將所需的全部物品移入安全柜，避免雙臂頻繁穿過氣幕破壞氣流；并且在移入前用75%酒精擦拭表面消毒，以去除污染。 打開風機5～10分鐘，待柜內空氣凈化并氣流穩定后再進行實驗操作。將雙臂緩緩伸入安全柜內，至少靜止1分鐘，使柜內氣流穩定后再進行操作。 
  2、柜內物品擺放應做到清潔區、操作區與污染區基本分開，操作過程中物品取用方便，且三區之間無交叉。物品應盡量靠后放置，但不得擋住氣道口，以免干擾氣流正常流動。 操作時應按照從清潔區到污染區進行，以避免交叉污染。為防可能濺出的液滴，可在臺面上鋪一用消毒劑浸泡過的毛巾或紗布，但不能覆蓋住安全柜格柵。 
  3、工作時盡量減少人員走動以及快速開關房門，以防止安全柜內氣流不穩定。在實驗操作時，不可打開玻璃視窗，應保證操作者臉部在工作窗口之上。在柜內操作時動作應輕柔、舒緩，防止影響柜內氣流。 
  4、工作完成后，保持風機繼續運轉10～15分鐘，關閉玻璃窗，同時打開紫外燈，照射30分鐘。